猪钩端螺旋体病需在临诊症状和病理剖检的基础上，结合微生物学和免疫学诊断才能确诊。
1、微生物学诊断
病畜死前可采集血液、尿液。死后检查要在1h内进行，最迟不得超过3h，否则组织中的菌体大部分会发生溶解。可以采集病死猪的肝、肾、脾和脑等组织，病料应立即处理，在暗视野显微镜下直接进行镜检或用免疫荧光抗体法检查。病理组织中的菌体可用姬姆萨氏染色或镀银染色后检查。病料可用作病原体的分离培养。
2、血清学诊断
主要有凝集溶解试验、微量补体结合试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、炭凝集试验、间接血凝试验、间接荧光抗体法以及乳胶凝集试验。
3、动物试验
可将病料(血液、尿液、组织悬液)经腹腔或皮下接种幼龄豚鼠，如果钩端螺旋体毒力强，接种后动物于3～5天可出现发热、黄疸、不吃、消瘦等典型症状，最后发生死亡。可在体温升高时取心血作培养检测病原体。
4、分子生物学诊断技术
可用DNA探针技术、PCR技术检测病料中的病原体。
5、鉴别诊断
猪的钩端螺旋体病应与猪附红细胞体病、新生仔猪溶血性贫血等相区别。
